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树舌灵芝深层发酵培养基的优化研究

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文章摘要:树舌灵芝深层发酵培养基的优化研究,有价值翻译质点,拓展爱情网别有心肠。

阅读次数:37 发布时间:2018/10/15 18:40:07

  今天喆图小编就来说说树舌灵芝又称树舌扁灵芝,六肖:属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非菌褶目、灵芝菌科、灵芝属。树舌具有广泛的药理活性,民间用其治疗食道癌、肺结核,临床用于治疗腹水癌、神经系统疾病、肝炎、心脏病、糖尿病和糖尿病并发症,预防和治疗胃溃疡、急慢性胃炎、十二指肠溃疡、胃酸过多等胃病。另外研究表明,树舌三萜类物质具有血压双向调节、抗肿瘤、抗病毒等药理活性。目前国内对树舌灵芝的化学成分和药理学研究得比较多,但对树舌灵芝深层发酵方面的研究较少。深层发酵培养树舌菌丝体具有发酵周期短、工艺简单、易控制、适于工业化大生产等优点。本试验应用高氯酸——香草醛显色法来测定树舌灵芝发酵菌丝总三萜类化合物含量,以总三萜产量为基准,筛选出树舌灵芝深层发酵的最适培养基。

    通过单因素试验,确定树舌灵芝的适宜氮源为豆饼粉,适宜碳源为米糠和蔗糖;在此基础上,以筛选的碳源、氮源和无机盐KH2PO4 和MgSO4·7H2O为考察因素,以总三萜产量为主要指标利用正交试验优化培养基配方比例,确定树舌灵芝液体发酵培养基配方为:米糠4%、蔗糖1%、豆饼粉4%、KH2PO4 0.2%、MgSO4·7H2O 0.05%。  

     一、 (材料和六肖 )

    1、实验所需材料  硝酸铵、硫酸铵、氯化铵、硝酸钾、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、磷酸氢二钾、硫酸镁、高氯酸、冰醋酸、香草醛均为分析纯;齐墩果酸对照品,中国药品生物制品检定所;豆饼粉、玉米粉、麦芽粉、甘薯粉、米糠和麸皮均为提取液,煮沸0.5h后用纱布过滤制得。 

    2、实验用主要仪器设备 

鼓风干燥箱,立式高压灭菌锅,电子天平,紫外分光光度计,恒温水浴锅恒温摇床恒温培养箱。  

    二、(实验方法  :基本培养基)  

    1.1 斜面培养基  PDA培养基为土豆20%,葡萄糖2%,琼脂2%,pH自然。接一块绿豆粒菌块接种于PDA培养基的中央,放入恒温培养箱中25℃恒温培养7天。 

    1.2 液体培养基  玉米粉1%,蔗糖2%,蛋白胨0.5%,KH2PO4 0.1%,MgSO4·7H2O 0.05%,pH自然。 

    1.3 氮源筛选培养基  葡萄糖2%,可溶性淀粉1%,KH2PO4 0.1%,MgSO4·7H2O 0.05%,PH自然。分别以豆饼粉、麸皮、蛋白胨、酵母膏、硫酸铵、硝酸铵、氯化铵、硝酸钾为氮源,添加量为2%。 

    1.4 碳源筛选培养基  麸皮2%,KH2PO4 0.1%,MgSO4·7H2O 0.05%,pH自然。分别以葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、玉米粉、麦芽粉、甘薯粉、米糠等为碳源,添加量为3%。  

培养方法  

    2.1 种子液制备  将斜面菌种分割成黄豆大小,接种到液体培养基中,250mL三角瓶装液量100mL,于恒温摇床中25℃,120r/min振荡培养10d得一级种。将已经培养好的一级种以体积分数10%接种到同样液体培养基中,500mL三角瓶装液量200mL,在与一级种同样条件下培养7d得种子液备用。  

    2.2 培养基筛选  将制备好的种子液按体积分数10%接种量接种到不同的碳氮源培养基及正交试验筛选培养基中,250mL三角瓶装液量100mL,于恒温摇床中25℃,120r/min振荡培养7d后收集菌丝体。分析不同碳源、氮源对菌丝体生物量和三萜总量的影响。每次试验重复3次,结果取平均值。   

    2.3 混合碳氮源培养基正交试验  根据单因素试验筛选结果,并考虑到低投入高产出的原则,选用米糠和蔗糖作为复合碳源,豆饼粉作为氮源,磷酸二氢钾和硫酸镁作为无机盐,按L9(34)设计四因素三水平试验,9个组合,4次重复,优化培养基。  

    2.4 发酵菌丝体生物量测定  采用细胞干重法,取100ml发酵液,用100目纱网过滤得菌丝体,并用蒸馏水反复冲洗,至滤出液澄清为止,收集菌丝体,于60℃鼓风干燥箱中烘干至恒重,称重。  

    三、(三萜含量测定)  

    3.1 标准溶液的制备(200μg/ml齐墩果酸) 称取干燥至恒重的齐墩果酸20mg,置于100ml的容量瓶中加无水乙醇溶解,并定容至刻度,作为对照品溶液。 

    3.2 样品溶液的制备   取样品0.5g(精准到万分之一),加入10ml无水乙醇,超声波提取30min后,摇匀,过滤,取滤液,定容至50mL,即得样品溶液。用分光光度法测定样品中灵芝三萜物质含量。  

    3.3 标准曲线的制作   精密吸取齐墩果酸标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL, 于6只具塞磨口试管中。加5%香草醛-冰醋酸液0.4mL,摇匀。再加入0.6mL高氯酸,置于60℃恒温水浴锅中20 min,冰浴冷却后,加冰醋酸5.0 mL,摇匀,置于室温15 min后,按分光光度法(《中国药典》2005版 I部附录VA),以试剂为空白,在545nm处比色测定吸光度值。以齐墩果酸浓度(g/ml) 为横坐标,吸光度A为纵坐标,作图得标准曲线。 

    3.4 样品的测定   吸取1ml样品溶液,按标准曲线方法测定吸光度。用标准曲线法计算样品中总三萜酸提取物质量。  

    以上内容仅供参考,如需了解详情请致电喆图!喆图人将真诚为您服务!

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